前面陈老湿写了篇《这个技术被NATURE文章用疯了》（点这里），那同样作为CNS的SCIENCE和CELL最近有没有用基于生物膜干涉技术的Fortebio相互作用仪的文章呢？还真不少，光2018年11月的前5天就发表了一篇SCIENCE^【1】，和一篇CELL^【2】。陈老湿又激动了，这两篇到底做了什么呢？

那篇CELL揭示了NLRP炎性小体中的NLRP6作为革兰氏阳性菌细胞壁成分LTA（脂磷壁酸）的受体，参与细菌侵染机体的过程。BLI主要用来做LTA和受体NLRP6的相互作用。而另外一篇SCIENCE不仅用BLI做了相互作用获得了亲和力，还脑洞大开的用BLI做了另外一个方法，陈老湿卖个关子，先说说这篇文章的背景吧。

“糖葫芦”版串联纳米抗体

流感病毒是一类容易突变的病毒，对研发广谱性中和抗体一直是一个挑战，但是目前有一些针对某种亚型的中和抗体正在研发中（点这里可以看：BLI技术在流感病毒中的应用1，应用2）。

如果把能识别不同亚型流感病毒的抗体结合成一个分子，那这个分子不是就可以识别所有的流感病毒了吗？

这篇SCIENCE筛选出了可以和流感病毒HA蛋白结合的四种纳米抗体(38，36，83，84)，前两者主要识别甲型流感病毒，后两者主要识别乙型流感病毒，通过晶体结构发现这些纳米抗体都结合HA的相对保守部位。作者像“糖葫芦”一样把这四个纳米抗体串联起来了，做成了多域抗体（multidomain antibody）MD2407，MD3606。

病毒中和实验表明MD2407，MD3606都显示出无以伦比的光谱性中和范围，包含了甲型和乙型的各类流感病毒，并在小鼠体内对各种流感病毒起到了保护作用。

纳米抗体与HA的亲和力（BLI法）

这个就是相互作用仪最典型的应用了----亲和力检测。可以看到多域抗体MD2407和MD3606不仅保留了每个纳米抗体的结合能力，而且比单个纳米抗体的亲和力高。这个可能和多域抗体的亲合效应（avidity）有关。

纳米抗体对HA的构象变化抑制效果

这里就是这篇文章的精髓之处了，他们还用BLI技术检测了这些抗体是否可以抑制HA的结构改变。

病毒要侵染机体，首先其HA蛋白被蛋白酶处理后形成cleaved HA，然后在低pH中发生构象变化。此时，在DTT处理下，HA轻链可以脱落。如果一个抗体结合在HA的茎部保守部位就不会有这种构象变化，因此就不会在低pH和DTT中发生脱落。这种脱落可以在BLI上产生负的信号，通过负信号的多少，可以知道抗体的抑制能力。负信号越小，抑制能力越强。

首先链霉亲和素传感器上固化生物素化cleaved HA，最上面是非竞争性抗体在DTT步骤中产生负信号，当中为示意图，下面是竞争性抗体在DTT中不会产生负信号。

BLI的实验结果显示，多域抗体MD2407和3606对不同亚型的流感病毒HA均有抑制作用，而单个纳米抗体只能抑制某个亚型的流感病毒HA构象变化。

这篇SCIENCE文章还用FORTEBIO相互作用仪做了多域纳米抗体的功能实验，用轻链解离的负信号来对抗体的抑制能力进行评估，构思巧妙，扩展了相互作用仪器的应用。这篇文章单位是大名鼎鼎的scripps研究所，不亏为世界顶级生物医学研究机构！炉火纯青的方法学是出大研究成果的前提，Fortebio的BLI技术因为操作简单，易于维护等优点，可以方便的进行方法学开发，快速的实现各种脑洞大开的方法。好好用BLI，CNS在等着你哦~~

参考文献

1)The NLRP6 Inflammasome Recognizes Lipoteichoic Acid and Regulates Gram-Positive Pathogen Infection.Cell 175,1–14

2)Universal protection against influenza infection by a multidomain antibody to influenza hemagglutinin.Science 362,598–602(2018)